Splošni podatki

Faze projekta

Projektno delo je razdeljeno na več delovnih sklopov.

DS1: Vključevanje živali in eksperimentalni protokol

V tem delovnem sklopu bomo izbrali dvajset odraslih konj s potrjeno diagnozo hude oblike astme (SEA, severe equine asthma). Pri konjih bomo izzvali klinično poslabšanje astme z antigenskim izzivom. Opravili bomo meritve pljučne funkcije in izvedli obsežen klinični pregled, ki bo omogočal klinično oceno po vnaprej definirani lestvici. Iz podkožja ob korenu repa bomo odvzeli maščobno tkivo za uporabo v DS2.

DS2: Gojenje adMSC in izolacija izvenceličnih veziklov

Iz maščobnega tkiva bomo izolirali matične celice, ki jih bomo gojili po ustaljenem protokolu. Del celic bomo gojili v pogojih za zbiranje kondicioniranega medija, iz katerega bomo z metodama koncentriranja in velikostno izključitveno kromatografijo izolirali izvencelične vezikle. Celice in vezikle bomo ustrezno karakterizirali.

DS3: Terapija

Konji bodo razdeljeni v dve skupini. Avtologne adMSC ali njihove izvencelične vezikle bomo injicirali v desni pomožni pljučni reženj. Ob injiciranju bomo določili klinično oceno v času T1. Tri teden po T1 bomo pri konjih ponovno ocenili klinično stanje (čas T2).

DS4: Vrednotenje izražanja mRNA citokinov

Spremljali bom izražanje genov za citokine IL-1β, IL-4, IL-8, IL-17, TNF-α, IFN-γ in NFκB z uporabo kvantitativne verižne reakcije s polimerazo z reverzno transkripcijo (RT-qPCR). V vzorcih BALf bomo kvantificirali vsebnost citokinov z encimskoimunskimi testi (ELISA). Z izolirano RNA bomo pripravili knjižnice majhnih nekodirajočih RNA, ki jih bomo sekvencirali in obdelali z bioinformatskimi orodji. 
 

Vsebinski opis projekta

Huda oblika astme (SEA, severe equine asthma) je pogosto obolenje pri konjih. Simptomi SEA vključujejo povečano preobčutljivost in odzivnost dihal na alergene v vdihanem zraku ter posledično razvoj kroničnega nevtrofilnega vnetja dihalnih poti, reverzibilne bronhokonstrikcije, kopičenje sluzi in preoblikovanje dihalnih poti. Patogeneza obolenja je podobna tudi pri ljudeh s hudo obliko astme. Raznolikost fenotipov in sub-fenotipov astme pri obeh vrstah je slabo raziskana, kar omejuje razvoj in uporabo ciljnih terapij. Zdravljenje SEA trenutno vključuje zmanjšanje izpostavljenosti alergenom, zdravljenje z lokalnimi ali sistemskimi protivnetnimi zdravili, uporabo bronhodilatatorjev in antibiotikov. Ker s temi terapevtskimi strategijami le lajšamo simptome in je prognoza zdravljenja slaba, obstaja velika potreba po razvoju novih strategij zdravljenja. Za številna kronična obolenja se v zadnjem času uveljavljajo nove oblike zdravljenja z uporabo regenerativne celične terapije. V predhodni študiji smo že pokazali, da je zdravljenje z mezenhimskimi matičnimi celicami iz maščobnega tkiva (adMSC) varno in ima pozitivne učinke na zmanjšanje simptomov SEA. Izvencelični vezikli, ki izvirajo iz adMSC pa predstavljajo še bolj napredno, specifično in stabilno obliko brez-celičnega zdravljenja v primerjavi z MSC.

Sestava projekte skupine

https://cris.cobiss.net/ecris/si/sl/project/20825